Cómo Leer Electroforesis de Proteínas

Como Leer Electroforesis de Proteinas

Dodecil sulfato de sodio-electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) es un metodo bioquimico de la identificacion de las proteinas en solucion. Como se ilustra por Mathews et al en "Bioquimica" de la proteina de las muestras se cargan primero en 'pozos' o agujeros en uno de los extremos del gel de poliacrilamida bloque. Un campo electrico se aplica el gel. SDS, añadido a las muestras cargadas, niega el natural de la carga de las proteinas. Por esta razon, la proteina de peso molecular unico que determina la velocidad de migracion de las proteinas a medida que se mueven a traves del gel hacia la carga positiva del polo, notas Bitesize Bio. Multiples proteinas en la misma muestra, por lo tanto, separados unos de otros y migrar a diferentes posiciones.

de dodecil sulfato de Sodio-electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) es un metodo bioquimico de la identificacion de las proteinas en solucion. Como se ilustra por Mathews et al en 'Bioquimica' de la proteina de las muestras se cargan primero en 'pozos' o agujeros en uno de los extremos del gel de poliacrilamida bloque. Un campo electrico se aplica el gel. SDS, añadido a las muestras cargadas, niega el natural de la carga de las proteinas. Por esta razon, la proteina de peso molecular unico que determina la velocidad de migracion de las proteinas a medida que se mueven a traves del gel hacia la carga positiva del polo, notas Bitesize Bio. Multiples proteinas en la misma muestra, por lo tanto, separados unos de otros y migrar a diferentes posiciones.
Cosas Que necesitara

• la Fotografia de un gel de SDS-PAGE, se tiñeron
• la Clave para el marcador de peso molecular utilizado

• Regla
• Pluma

• Oriente el gel de fotografia. 'Top' es la ubicacion de los pozos donde las muestras fueron originalmente añadido. 'De abajo', donde las muestras migran hacia el y la mayoria de las veces contiene el colorante frontal que indica que la migracion de los frontales de las muestras. Ya sea a la izquierda o a la derecha debe contener un 'marcador',' se utiliza como una prediccion del peso molecular de la guia.
• la Etiqueta de las muestras para cada carril. En la parte superior, las muestras de agregado a los pozos se han migrado de forma vertical en 'carriles.' Por lo tanto, todas las barras visibles en una columna vertical vino de la muestra cargada directamente encima de el. Uso de la regla y el lapiz para poner fronteras en el carril si es dificil visualizar columnas.
• la Etiqueta de los tamaños moleculares de las bandas del marcador de carril. Comercialmente disponible marcadores vienen con una imagen del patron de bandas a esperar junto con los pesos moleculares de cada banda. Las bandas son el oscuro horizonal 'bares', que en realidad son teñidos de proteinas incrustadas en el gel.
• Dibujar la luz de las lineas horizontales que se extienden desde cada mp de la banda a la orilla opuesta del gel. Ser cuidadoso al realizar estas lineas paralelas a los pozos y el medio de contraste en el delantero. Estas lineas indican donde las proteinas de peso molecular indicado por cada una de las bandas marcadoras estarian ubicados en cada carril. Por ejemplo, una banda en el carril 4, que se encuentra justo debajo de la linea extendida desde el 25-kilodalton marcador de banda sugieren que el carril de 4 bandas es casi, pero no exactamente 25 kilodaltons en el peso molecular.
• la Etiqueta de cada banda en cada carril con la estimacion de su peso molecular. Utilizar los marcadores como una guia, y la estimacion de los valores entre los marcadores de tamaños.
• a Continuacion el gel de fotografia, hacer una lista de 'las proteinas' para cada carril. Comenzar diciendo lo que se conoce acerca de cada una de las muestras, tales como su origen o condiciones. A continuacion, la lista de el peso molecular estimado de cada banda en el carril. Carriles con una banda indicar que la muestra solo contiene una proteina. Carriles con multiples bandas indican la presencia de multiples proteinas. Las bandas que se ejecutan con la migracion delanteras son mas pequeñas que la sugerida por el marcador mas cercano y probablemente no puede ser predicho, excepto como 'menor que' el marcador indica.
• En las proteinas de la lista, tenga en cuenta rarezas. Un 'untado' apariencia puede indicar que muchas de las proteinas que estan presentes o que la viscosidad de la muestra afectada su migracion Si las bandas parecen ir mas alla del borde de la calle o son muy grandes en comparacion con otras bandas, entonces la concentracion de la proteina es probablemente demasiado alto y debe ser diluido en el futuro de la electroforesis. Un tinte grisaceo a lo largo del carril, mas oscura que el fondo de gel de color, indica indistinguible fragmentos de la proteina.
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• Determinar la identidad de las proteinas en cada carril. Aunque esto se hace utilizando solo el peso molecular, la fuente de cada carril es probable que indican pistas asi. Considere la posibilidad de que bajo ciertas condiciones, las proteinas pueden mantener un dimero o trimero de la asociacion en un gel. Por lo tanto, una proteina puede aparecer en un gel como tres distintas bandas. Incluso si las proteinas no pueden ser identificados, la oscuridad relativa de las bandas puede implicar la concentracion de las proteinas en solucion. Cualquier curioso y desconocido de las proteinas puede ser aislado directamente desde el original de gel y se envian para su identificacion.